BPS Science 檢測(cè)試劑盒 KRAS 異構(gòu)體 B 偶聯(lián)核苷酸交換檢測(cè)試劑盒

●描述

KRAS IsoformB Coupled Nucleotide Exchange Assay Kit 設(shè)計(jì)用于通過(guò)監(jiān)測(cè)效應(yīng)蛋白（例如 Raf1 的 Ras 結(jié)合域 (RBD-cRaf)）與 KRAS 的結(jié)合來(lái)篩選和分析 KRAS IsoformB 拮抗劑/抑制劑。使用該試劑盒，只需在微量滴定板上進(jìn)行幾個(gè)簡(jiǎn)單的步驟即可進(jìn)行核苷酸交換檢測(cè)。首先，將含有 GDP 負(fù)載的 KRAS 異構(gòu)體 B 的樣本與 SOS1 和 GTP 一起孵育以進(jìn)行核苷酸交換。接下來(lái)，添加 RBD-cRAF 并孵育以進(jìn)行

效應(yīng)器-RAS 結(jié)合。然后，添加受體和供體珠并孵育以進(jìn)行檢測(cè)，然后讀取 Alpha 計(jì)數(shù)。

SOS1(son of sevenless) 是一種鳥(niǎo)嘌呤核苷酸交換因子，可促進(jìn) GDP 與 GTP 的交換。加載 GDP 的 KRAS 異構(gòu)體 B 處于非活動(dòng)狀態(tài)，不與 cRAF 的 Ras 結(jié)合域 (RBD) 相互作用。SOS1 協(xié)助從 KRAS 同種型 B 釋放 GDP，以便 GTP 可以占據(jù)核苷酸結(jié)合口袋。這導(dǎo)致 KRAS 異構(gòu)體 B 的構(gòu)象變化，允許其與 RBD-cRAF 結(jié)合。KRAS IsoformB Coupled Nucleotide Exchange Assay Kit 利用 GST 標(biāo)記的 RBD-cRAF 和 His 標(biāo)記的 KRAS Isoform B 在 Alpha 測(cè)定中測(cè)定 KRAS 與 RBD-cRAF 的結(jié)合。谷胱甘肽受體和 Ni 螯合物供體珠通過(guò) KRAS 和 RBD-cRAF 的結(jié)合進(jìn)入近端范圍，使能量在激光激發(fā)后從供體轉(zhuǎn)移到受體珠。

背景

高水平的野生型 KRAS 會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞復(fù)制和生長(zhǎng)減慢，并增加細(xì)胞凋亡。這可以由細(xì)胞壓力、某些類(lèi)型的輻射、化學(xué)信號(hào)和其他提示引起。野生型 KRAS 還可以通過(guò)與突變 KRAS 蛋白二聚化來(lái)防止突變 KRAS 過(guò)度激活。

研究 KRAS 野生型和突變形式的行為差異尤為重要，因?yàn)?KRAS 突變導(dǎo)致了 30% 以上的人類(lèi)癌癥。影響核苷酸交換（GDP 到 GTP）反應(yīng)的化合物提供了一種抑制 KRAS 驅(qū)動(dòng)腫瘤中腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的新方法。2021 年，美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)使用 AMG510（Sotorasib），這是一種針對(duì)非鱗狀非小細(xì)胞肺癌的強(qiáng)效 KRAS G12C 抑制劑。

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