簡要描述:BCA法蛋白含量測定試劑盒 上海牧榮生物科技有限公司專業(yè)實驗室產(chǎn)品
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應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),制藥 |
BCA法蛋白含量測定試劑盒
正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定
測定意義:
樣品可溶性蛋白質(zhì)含量常常用于酶活性計算。此外,可溶性蛋白質(zhì)含量也用于食品等質(zhì)量分析。
測定原理:
堿性條件下,蛋白質(zhì)中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽鍵,能將Cu2+還原成Cu+;2分子的BCA與Cu+結(jié)合,生成紫色絡(luò)合物,在540-595nm有吸收峰,562nm處吸收峰*強(qiáng)。
自備儀器和用品:
臺式離心機(jī)、恒溫水浴鍋、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、移液器和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑A:液體25mL×1瓶,4℃保存。
試劑B:液體0.5mL×1支,4℃保存。
標(biāo)準(zhǔn)品:液體2mL×1支,4℃保存。
工作液配制:臨用前請根據(jù)擬用工作液體積(樣本數(shù)×0.2mL),將試劑A和B按照50:1的比例混合,蓋緊后充分混勻。
樣品中可溶性蛋白質(zhì)提取:
液體樣品:澄清液體樣品可以直接測定。
組織樣品:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液(自備,根據(jù)需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水)
冰浴勻漿,10000rpm,4℃離心10min,取上清,即待測液。
3. 細(xì)菌、細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后10000rpm,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。
測定操作:
1. 可見分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長到562 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 工作液置于60℃水浴預(yù)熱30 min。
空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 測定管 | |
蒸餾水(μL) | 4 | ||
標(biāo)準(zhǔn)品(μL) | 4 | ||
待測液(μL) | 4 | ||
工作液(μL) | 200 | 200 | 200 |
混勻后置于60℃保溫30min,于微量玻璃比色皿/96孔板,于562nm處測定吸光值A(chǔ),分別記為A空白管、A標(biāo)準(zhǔn)管、A測定管。 |
注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要做一次。
計算公式:
Cpr (mg/mL)= C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)
=0.5×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)
Cpr (mg/g 鮮重)= C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷ W
=0.5×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷ W
W: 樣本質(zhì)量,g
注意事項:
BCA法蛋白含量測定試劑盒,適用于測定蛋白濃度在20-5000μg/ml樣品。測定前取1-2個樣做預(yù)實驗,若A測定管-A空白管﹥1.5,需將樣本用提取液稀釋后再測定,以確保測定的準(zhǔn)確性。
上海牧榮生物科技有限公司
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公司突出創(chuàng)新思維,提高工作效能,減低運作成本,為客戶提供優(yōu)惠的價格。
BCA法蛋白含量測定試劑盒
中文名稱:甲泛葡胺
英文名稱:Metrizamide
分子式:C18H22I3N3O8
分子量:789.1
CAS號:31112-62-6
級別:Reagent Grade
EINECS編號:250-475-5
儲存條件:2~8℃
中文別名:甲泛葡胺、阿米派克、甲泛影酰胺、室椎影
英文別名:2-((3-(acetylamino)-5-(acetylmethylamino)-2,4,6-triiodobenzoyl)amino)-2-deox、2-(3-ace***ido-2,4,6-triiodo-5-(n-methylace***ido)benzamido)-2-deoxy-d-gluco
是否危險:否
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