抗體定量是可重復(fù)標(biāo)記和可靠鑒定各種單克隆抗體類別的重要步驟。它提供了可操作的信息，包括特定應(yīng)用的最佳稀釋度、如何有效純化特定抗體以及哪些細(xì)胞系將產(chǎn)生最有價(jià)值的結(jié)果。

評(píng)估總抗體濃度可能具有挑戰(zhàn)性，因?yàn)楦鶕?jù)用于純化樣品的技術(shù)，只有總計(jì)數(shù)的一部分包含活性抗原結(jié)合抗體。此外，分子科學(xué)家可以使用各種實(shí)驗(yàn)方法來進(jìn)行抗體定量。那么哪種技術(shù)最好呢？

抗體終點(diǎn)滴定

滴定用于測量未知溶質(zhì)的濃度。抗體濃度由終點(diǎn)指示，通常是溶液中跟隨或等于等當(dāng)點(diǎn)的顏色變化。盡管該技術(shù)有其優(yōu)點(diǎn)，但抗體滴度可能會(huì)產(chǎn)生誤導(dǎo)，特別是對(duì)于含有高濃度非活性或低親和力抗體的樣品。

酶聯(lián)免疫吸附測定 (ELISA)

ELISA 試劑盒在很大程度上取代了濕化學(xué)實(shí)驗(yàn)室中的終點(diǎn)滴定，因?yàn)樗鼈兲峁┝烁叩闹噩F(xiàn)性和總抗體濃度的準(zhǔn)確測量。它們的工作原理是抗體-抗原結(jié)合，允許使用與報(bào)告酶綴合的抗體對(duì)特定分析物進(jìn)行準(zhǔn)確定量，報(bào)告酶在添加到底物時(shí)會(huì)進(jìn)行催化。同樣，反應(yīng)通常由顏色變化來指示。

傳統(tǒng)的 ELISA 試劑盒通常被認(rèn)為是臨床診斷應(yīng)用的金標(biāo)準(zhǔn)，但這種免疫吸附測定有多種形式，包括直接、夾心和競爭 ELISA 試劑盒。

然而，結(jié)果的精度通?；趩吸c(diǎn)插值，單點(diǎn)插值依賴于落在標(biāo)準(zhǔn)曲線內(nèi)的樣品稀釋度光密度。

通過分光光度法進(jìn)行抗體定量

分光光度法可以根據(jù) 280 nm 處的吸光度快速準(zhǔn)確地進(jìn)行抗體定量。通過 280 nm 處的分光光度吸光度進(jìn)行抗體定量是一種簡單且經(jīng)濟(jì)有效的方法。它提供了輸入特定消光系數(shù)的機(jī)會(huì)，無需標(biāo)準(zhǔn)曲線或檢測試劑即可獲得準(zhǔn)確的測量結(jié)果，并可以評(píng)估熒光標(biāo)記抗體的染料摻入情況。此外，用戶還可以使用 Bradford 或 Lowry 等比色測定法進(jìn)行分光光度抗體定量。