33d蜜桃成熟时,嫩草影院网站进入,极品无码AV国模在线观看,欧美午夜在线

您好!歡迎訪問上海牧榮生物科技有限公司網(wǎng)站!
咨詢熱線

17621170138

當前位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 成功傳代的方法——解離法

成功傳代的方法——解離法

更新時間:2023-08-24      點擊次數(shù):765

在開發(fā)特定細胞系的培養(yǎng)條件時需要考慮許多參數(shù)。我們都知道 pH 平衡、氧氣水平和血清濃度是影響培養(yǎng)成敗的重要變量。然而,包括與細胞需求相匹配的解離方法的傳代方案也同樣重要??紤]到這一點,我們將回顧一些常見解離實踐背后的原則,以幫助您根據(jù)細胞系的具體性質(zhì)定制方法。

懸浮生長的細胞易于傳代培養(yǎng)。只要在細胞耗盡營養(yǎng)供應(yīng)之前將細胞稀釋到合適的新鮮培養(yǎng)基中,它們就會表現(xiàn)得很好。另一方面,單層生長的細胞彼此之間以及與培養(yǎng)皿之間形成蛋白質(zhì)接觸。在將細胞懸浮在培養(yǎng)基中、離心并重新鋪板之前,必須先將這些物質(zhì)破壞。因此,必須特別考慮以確保解離條件破壞細胞接觸而不殺死細胞。

胰蛋白酶有時(但并非總是)是答案

在決定解離條件時,研究者應(yīng)考慮細胞形成的鍵的類型。一些貼壁細胞系僅形成微弱的接觸,只需將培養(yǎng)瓶敲擊手掌或?qū)⑴囵B(yǎng)瓶敲擊臺面即可破壞接觸。其他貼壁細胞系,特別是那些源自上皮的細胞系,會形成牢固的多蛋白緊密連接,只能通過酶消化來破壞;在這些情況下,通常使用胰蛋白酶(一種絲氨酸蛋白酶)。源自上皮的細胞還可以表達鈣粘蛋白,其介導非常強的鈣依賴性粘附或橋粒連接。在這種情況下,可能需要添加鈣螯合劑(如 EDTA)來隔離鈣,以有效地解離細胞。

優(yōu)化解離后的活力

為了優(yōu)化解離后的細胞活力,反應(yīng)條件應(yīng)與細胞接觸的強度相匹配。例如,如果標準胰蛋白酶/EDTA 消化(通常為 0.05%-0.5%)不能有效消化細胞鍵(10-15 分鐘內(nèi)),則可能很難在細胞開始死亡之前將其從平板上移除,并且細胞活力也會受到影響。將會受到不利影響。在這種情況下,可能需要更高濃度的胰蛋白酶/EDTA 或其他酶,例如膠原酶。另一方面,如果反應(yīng)過于劇烈,細胞可能會裂解或失去重新附著到平板上所需的表面蛋白,這兩種情況都會導致活力降低。此外,裂解的細胞會釋放基因組 DNA,導致活細胞聚集,使存活細胞更難重新鋪板,因此需要添加 DNase。

準備是良好解離的關(guān)鍵

如果您已將反應(yīng)強度與細胞系的粘附特性相匹配,但您的細胞仍然難以去除,您可能會發(fā)現(xiàn)問題在于細胞準備解離的方式。生長培養(yǎng)基中可能存在抑制胰蛋白酶的成分,例如血清,但這可以通過簡單地用Dulbecco PBS沖洗細胞一到兩次來克服 (不含鈣或鎂)在添加解離試劑之前。也可能是細胞保持匯合的時間太長。在這些條件下,細胞可能會形成異常牢固的細胞-細胞和細胞-表面連接,并且異常難以破壞。出于這個原因,以及為了培養(yǎng)物的整體健康,建議細胞在達到 100% 匯合(即 70-90% 匯合)之前進行傳代。

結(jié)論

有了對解離試劑如何工作的基本了解,研究人員可以開發(fā)一種優(yōu)化的方案,同時考慮細胞粘附特性的強度和質(zhì)量。細胞解離的優(yōu)化方案將確保成功傳代并延長細胞在培養(yǎng)物中的壽命。


掃一掃,關(guān)注微信
地址:上海市嘉定區(qū)安亭鎮(zhèn)新源路155弄16號新源商務(wù)樓718室 傳真:Shanghai Mulong Biotechnology
©2025 上海牧榮生物科技有限公司 版權(quán)所有 All Rights Reserved.  備案號:滬ICP備2022017655號-1
亚洲日韩欧美一区二区三区| 精品人妻少妇一区二区| 攀枝花市| 蜜桃色| 91久久综合亚洲鲁鲁五月天| av老司机在线观看| 亚洲av乱码一区二区三区挤奶| 小受在地铁被灌浓精男男| 欧美日韩国产在线高清视频| 夜夜嗨AV一二三区无码| 成人精品免费视频在线观看| 成在线人永久免费视频播放| 国产精品有码无码AV在线播放| 国产国产成年年人免费看片| 亚洲a在线观看无码| 亚欧中文字幕久久精品无码| 久久精品国产99精品最新| 亚洲av无码专区亚洲av网站| 国产三区在线成人AV| 性虎精品无码av导航| 一本久久A久久精品亚洲| 亚洲性啪啪无码AV天堂| 97人妻碰碰碰久久久久| 1717国产精品久久| 人妻 日韩 欧美 综合 制服| 成 人影片 免费观看| 中国凸偷窥xxxx自由视频| 久久九九久精品国产综合一千收藏| 日韩人妻无码中文字幕一区| 亚洲综合色区中文字幕| 思思久久99热只有频精品66| 人摸人人人澡人人超碰手机版| 女被男啪到哭免费视频 视频| 国产天堂亚洲国产碰碰| 樱花草在线社区WWW| 国产精品-区区久久久狼| 99热都是精品久久久久久| WWWW亚洲熟妇久久久久| 国产freexxxx性播放| 扒开末成年粉嫩的小缝图片| 日韩精品一区二区三区色欲AV|